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abcepta寧夏代理
產品時間:2022-05-27
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EN1Engrailed 1)抗體(N-term

親和純化兔多克隆抗體 (Pab)


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EN1 Antibody (N-term) (Cat#AP7278a) 染色的 U251 細胞的熒光圖像。用 4% PFA 固定 U251 細胞(20 分鐘),用 Triton X-100 透化(0.1%10 分鐘),然后用EN1 一抗(1:25,37℃ 1 h)。二抗使用 Alexa Fluor® 488 偶聯驢抗兔抗體(綠色)(1:400,37℃ 50 分鐘)。細胞質肌動蛋白用 Alexa Fluor® 555(紅色)偶聯鬼筆環肽(7units/ml, 1 h at 37℃)。EN1免疫反應性明顯定位于Nucleus。

產品信息

應用     IFIHC-P、WB、E

初次加入       Q05925

反應性    人類, 老鼠

主持人    兔子

克隆性    多克隆

同型       兔免疫球蛋白

計算的 MW   40115

抗原區    1-30個氨基酸

附加信息

基因識別       2019

其他名稱       Homeobox protein engrailed-1, Homeobox protein en-1, Hu-En-1, EN1

目標/特異性  這種 EN1 (Engrailed 1) 抗體由用人 EN1 (Engrailed 1) N 末端區域 1-30 個氨基酸之間的 KLH 偶聯合成肽免疫的兔子產生。

稀釋       IF~~1:25

WB~~1:2000

IHC-P~~1:25

格式       含有 0.09% (W/V) PBS 中純化的多克隆抗體。該抗體通過蛋白 A 柱純化,然后進行肽親和純化。

貯存       2-8°C 下冷藏長達 2 周。如需長期儲存,請以小等份在 -20°C 下儲存,以防止凍融循環。

防范措施       EN1 (Engrailed 1) Antibody (N-term) 僅供研究使用,不得用于診斷或治療程序。

蛋白質信息

姓名       EN1

功能       需要正確形成頂端外胚層脊和正確的肢體背腹模式。

蜂窩定位       核。

A. 細胞溶解劑的制備。采用胰蛋白酶消化法和旋轉法收集細胞(匯合 t-25)。用100 ul 溶解緩沖液溶解球10分鐘。500,000細胞,lyze with 20 ul. 3。轉速14000/(16000) ,在4 ° c 下微加速10min。將上清液轉移到一個新的試管中,然后丟棄小球。測定蛋白質濃度(bradford 法,a280,或 bca)(我們使用 bio-rad bradford )6。取 x ul (= y ug 蛋白質) ,與 x ulof 2倍的樣品緩沖液混合。煮5分鐘,冷卻5分鐘。8??焖傩D降低凝結,加載凝膠 b。聚丙烯酰胺凝膠(14.5 cm × 16.5 cm)1。瓊脂糖塞: 1% 瓊脂糖溶于1 × 分解膠體緩沖液中。(我做50毫升,需要的時候就繼續融化,然后再加水來保持瓊脂二。)2。凝膠: 24毫升9% 凝膠5.4毫升40% 丙烯酰胺/雙丙烯酰胺(29:1的混合物)3毫升8x 分辨凝膠緩沖劑15.6毫升水12ul temed60 ul 20% 過硫酸銨3。堆疊凝膠: 8毫升40% 丙烯酰胺/雙丙烯酰胺(29:1的混合物)2毫升4 × 堆疊凝膠緩沖劑5毫升水8 u l/d 21.6 u l/20% 過硫酸銨

C. 凝膠的制備。組裝玻璃板和隔板(1.5毫米厚)。倒入瓊脂糖塞子(1-2毫米)。將流動凝膠倒入梳子孔下約1厘米處(20毫升)。用1ml 水飽和正丁醇密封。(可以在這里停下來,如果你愿意的話,可以把這個膠留在這里。)5.凝膠凝固后,倒出丁醇,用去離子水沖洗。倒入堆積凝膠(5毫升) ,立即插入組織塊。凝膠凝固后,放入明膠中浸泡。8。在運行凝膠之前,用運行緩沖器*沖洗油井。運行 gel1。在快速旋轉樣品后,裝入井中。2。記得用記號筆。我們直接使用15 ulbio-rad kaleidoscope 標準 # 161-0324。在恒定電流(35-37ma,電壓設置大于150v)下運行。4。通常播放時間是1.3小時。使用預制凝膠(來自 bio-rad 的預制凝膠)1。在凝膠裝置中組裝凝膠2。準備蛋白質樣品(10微克就夠了)。

3。使用5ul 的萬花筒標準。在200v (恒定電壓)下運行30min.f。膜制劑。切一塊 pvdf 薄膜(milliporeimmobilon-p # ipvh 00010)。2。在搖床上浸入甲醇5分鐘。去除甲醇,加入1xtransfer buffer 直到可以使用。膜轉移。為 bio-rad‘ stransblot 組裝"三明治"2。預濕海綿,濾紙(略大于凝膠)1 × 吸水緩沖器。海綿-濾紙-凝膠-濾膜-濾紙-海綿。轉移1小時15伏,在4 ° c 的攪拌板上。更大的蛋白質可能需要更長的轉移時間。對于迷你傳輸,100v1小時,加上冷敷和緩沖液。4。用氨基黑染色法浸泡膜5分鐘。用脫色緩沖液固定4 × 5分鐘。完成后,在室溫下浸泡隔膜一小時??贵w和檢測。在室溫條件下,與一級抗體稀釋至2ug/ml,總體積為3ml 的阻滯緩沖液中孵育1小時。用0.05% 吐溫20焦清洗4 × 5分鐘。與二級抗體1:10,000(hrpoanti-rabbit)在阻滯緩沖液中培養1小時,室溫4。用0.05% 吐溫20毫升洗滌4 × 5分鐘。用皮爾斯化學發光試劑盒(prod # 34080)檢測。

I 剝除斑點1。用0.05% 的吐溫20 pbs 上沖洗污漬。2。把污漬放進卡帕克袋子里,切成略大于污漬的大小。3。加入大約510毫升的剝離緩沖液。盡可能多地排除空氣和密封袋。5。浸泡在80 °c 水浴中20分鐘。用0.05% 的吐溫20 pbs 上清洗污漬。7。用5% bsa/tween20阻滯約1小時,或用3% bsa/tween20阻滯一夜。用于維斯特斯裂解緩沖液的緩沖液: 0.15 m nacl5毫米 edta,ph 81% triton x10010毫米 tris-clph 7.4,使用前添加: 1:10005 m dtt1:1000100毫米 pmsf 在異丙醇中1:10005 m ε-aminocatacid2x 樣品緩沖液: 130毫米 tris-cl,ph8.020% (v/v)甘油4.6% (w/v) sds0.02% 溴苯酚藍2% dtt8x 分辨凝膠緩沖液: 100 ml0.8 g sds (最后加入)36.3 g trizma (= 3 m)用濃縮 hcl4x 凝膠緩沖液: 100 ml 調整 ph 8.80.4 g sds (最后加入)6.05 g trizma base (= 0.5 m)調整 ph 值為6.810 x 運行緩沖液: 1 l30.3 g trizma base (= 0.25 m)144 g 甘氨酸(= 1.92 m)10 g sds (= 1%) -- 最后加入

不要調整 ph ! !10x 吸墨緩沖液: 1 l30.3 g trizma base (= 0.25 m)144 g 甘氨酸(= 1.92 m) ph 值應為8.3;。為防止細菌污染,將緩沖液剝離: 0.5 l (無菌過濾液,保持在4 °c)0.2 m 甘氨酸,ph 2.50.05% 吐溫20

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